缺血性腦卒中作為全球范圍內(nèi)成人第二大致死病因，在我國(guó)更是成人致殘和死亡的首要原因，約占所有腦卒中病例的 80%，具有高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高致殘率及高經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的顯著特點(diǎn)。目前，靜脈溶栓與機(jī)械取栓雖為急性缺血性腦卒中治療的金標(biāo)準(zhǔn)，但受限于狹窄的治療時(shí)間窗及再灌注損傷風(fēng)險(xiǎn)，臨床應(yīng)用效果受限，因此開發(fā)能有效抑制缺血性腦卒中后神經(jīng)炎癥、減輕腦損傷的新型療法迫在眉睫。

缺血性腦卒中后，小膠質(zhì)細(xì)胞中 NADPH 氧化酶（NOX）介導(dǎo)的氧化應(yīng)激是神經(jīng)炎癥和細(xì)胞死亡的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)機(jī)制。而電壓門控質(zhì)子通道 Hv1 在小膠質(zhì)細(xì)胞中高表達(dá)，與 NOX 協(xié)同產(chǎn)生活性氧（ROS），加劇腦損傷。此前研究發(fā)現(xiàn)，新型 Hv1 抑制劑 YHV984 具有高特異性，但存在兩大缺陷：水溶性差，限制體內(nèi)遞送；全身給藥易引發(fā)脫靶效應(yīng)（Hv1 在巨噬細(xì)胞、脾細(xì)胞等外周組織也有分布），導(dǎo)致毒副作用。因此，研究需為其設(shè)計(jì) “靶向遞送載體”，實(shí)現(xiàn)腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的精準(zhǔn)富集。

脂質(zhì)納米顆粒（LNP）是目前生物醫(yī)藥領(lǐng)域的明星載體，它不僅能根據(jù)需求進(jìn)行各種修飾，還和人體的相容性很好，早已在膠質(zhì)瘤、阿爾茨海默病等腦部疾病的治療中廣泛應(yīng)用。T7肽是一種能精準(zhǔn)對(duì)接腦血管內(nèi)皮細(xì)胞上轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的物質(zhì)，增強(qiáng)藥物穿越血腦屏障（BBB）的能力。近日，珠江醫(yī)院段傳志教授團(tuán)隊(duì)在Journal of Nanobiotechnology發(fā)表研究“Brain targeted lipid nanoparticles with Hv1 inhibitors alleviate neuroinflammation post-ischemic stroke”，構(gòu)建了一種搭載 Hv1 抑制劑 YHV984 的腦靶向脂質(zhì)納米顆粒 T7-LNP@YHV984，為缺血性腦卒中后神經(jīng)炎癥的治療提供了新思路。

T7-LNP@YHV984則采用薄膜水化-透析法制備，將YHV984 加入含 DLin-MC3-DMA、DSPC、膽固醇、DSPE-PEG2000-T7（摩爾比 50:10:38.5:1.5）的脂質(zhì)乙醇溶液，混合后滴入檸檬酸鈉緩沖液，經(jīng)透析獲得。同時(shí)制備了不含 YHV984的T7-LNP、非靶向LNP（eLNP）納米顆粒作為對(duì)照。對(duì)制備的納米顆粒進(jìn)行表征發(fā)現(xiàn)，T7-LNP@YHV984 平均粒徑為 108 nm，Zeta 電位為- 18.5 mV，呈規(guī)則球形，4℃下儲(chǔ)存 30天粒徑無著變化，YHV984包封率達(dá) 92.7%，體外釋放呈現(xiàn) “先快后慢” 特征，48 h釋放率超 80%，藥代動(dòng)力學(xué)研究顯示其體內(nèi)半衰期為 11.97 小時(shí)，顯著長(zhǎng)于游離 YHV984（1.75 小時(shí)），藥時(shí)曲線下面積（AUC）為 71.15 μg/mL?h，清除率（CL）為 0.34 mL/h，表明其具有良好的穩(wěn)定性、可控的藥物釋放能力及優(yōu)異的藥代動(dòng)力學(xué)性能。

Fig. 1 T7-LNP@YHV984的制備與表征

體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了 T7-LNP@YHV984 的生物相容性、靶向能力及抗炎效果。血腦屏障穿透實(shí)驗(yàn)中，基于 bEnd.3 細(xì)胞的模型顯示，T7-LNP@YHV984 的跨膜熒光強(qiáng)度顯著高于非靶向 eLNP，證明T7肽可有效介導(dǎo)其跨越血腦屏障；小膠質(zhì)細(xì)胞靶向與調(diào)控實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，BV2 細(xì)胞對(duì)T7-LNP@YHV984 的攝取率遠(yuǎn)高于 T7-LNP和 eLNP，且能顯著抑制 LPS 誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞向M1表型極化，促進(jìn)其向 M2 表型極化，同時(shí)降低OGD處理BV2細(xì)胞的ROS水平，降低原代神經(jīng)元凋亡率，并顯著提高HUVEC細(xì)胞的劃痕愈合率，體現(xiàn)出對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)及血管修復(fù)作用。

Fig. 2 細(xì)胞水平T7-LNP@YHV984的生物相容性和靶向能力

體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)則全面證實(shí)了T7-LNP@YHV984的腦靶向性、安全性及治療效果。腦靶向性驗(yàn)證中，tMCAO模型小鼠尾靜脈注射DiR標(biāo)記的 T7-LNP@YHV984 后，8小時(shí)腦內(nèi)熒光強(qiáng)度達(dá)峰值，且顯著高于T7-LNP，免疫熒光染色顯示納米顆粒與小膠質(zhì)細(xì)胞共定位，證明其具有優(yōu)異的腦內(nèi)富集能力和小膠質(zhì)細(xì)胞靶向特異性。

Fig. 3 tMCAO小鼠中T7-LNP@YHV984體內(nèi)靶向能力

治療效果方面，T7-LNP@YHV984可顯著增加梗死區(qū)腦血流恢復(fù)、降低腦梗死體積，改善神經(jīng)功能。分子機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，T7-LNP@YHV984 能顯著下調(diào)腦內(nèi) Hv1、NOX2、NLRP3 蛋白表達(dá)，減少促炎因子浸潤(rùn)，增加抗炎因子水平，降低 TUNEL 陽(yáng)性神經(jīng)元比例，從分子層面證實(shí)了其抗炎及神經(jīng)保護(hù)作用。

Fig.4 T7-LNP@YHV984表現(xiàn)出優(yōu)異的抗炎和促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)能力

總的來說，T7-LNP@YHV984 的研發(fā)為缺血性腦卒中治療開辟了精準(zhǔn)靶向抗炎的新路徑。它的優(yōu)勢(shì)很突出：載體核心成分 DLin-MC3-DMA 早已在臨床應(yīng)用中得到驗(yàn)證，安全性有保障；T7 肽與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合的靶向機(jī)制清晰，能讓藥物直擊病灶；還能同時(shí)解決現(xiàn)有治療手段面臨的時(shí)間窗窄、易引發(fā)再灌注損傷、副作用大等難題。未來若能突破肝臟攝取和長(zhǎng)期毒性等瓶頸，有望成為缺血性腦卒中急性期與恢復(fù)期聯(lián)合治療的候選方案，推動(dòng)神經(jīng)保護(hù)療法從廣譜抗炎向精準(zhǔn)調(diào)控邁進(jìn)。

文中涉及產(chǎn)品清單：